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[의학,약학] [생물학 test(실험) ] DNA의 분리 test(실험)

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작성일 23-11-08 19:42

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13. 12,000rpm에서 1분간 원심분리한다.

4.Discussion

이번 experiment(실험)에 사용된 mini-prep이라고 부르는 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다.

2.Materials

-Echerichia coli(Competent cell : DH5α), plasmid DNA(pUC19 vector
-마이크로 피펫, 소형 원심분리기, E-tube, Ice, plasmid DNA purification kit
-Buffer 조성
Resuspension buffer
50mM glucose, 25mM TrisCl (pH 8.…(drop)

3.Method

4. Resuspension buffer를 250㎕넣고 vortexing을 하여 pellet을 완전히 풀어준다. (주의-pellet이 딸려오지 않게 한다)

9. 12,000rpm에서 1분간 원심분리하고 collection tube에 있는 용액을 버린다. 박테리아 플라스미드는 비교적 작고, 염색체로부터 분리된 상태로 복제하는 원형의 DNA라는 것을 설명(explanation)하였다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다.

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1. Abstract & Introduction

DNA 절편을 클로닝하기 위한 방법들의 공통된 특징 중 하나는 박테리아와 플리스미드를 이용하는 것이다.

7. 12,000rpm에서 10분간 원심분리한다.

5. Lysis buffer를 250㎕넣고 5~6회 inverting해준다. 여기서는 유전자 재조합 DNA가 들어있는 대장균으로부터 직접 플라스미드를 추출하여 다음 experiment(실험)에 이용할 표본을 만들어 놓는다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에

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실험과제/생물의학

순서
설명

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다.

8. 상층액을 column에 옮긴다.

11. Washing bufferB 700㎕를 넣고 1분 원심분리하고 collection tube의 용액을 버린다.

12. column을 E-tube에 옮기고 50㎕의 elution buffer를 넣은 후 1분간 incubation한다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다.

11. 빈 collection tube에 column을 끼우고 12,000rpm에서 1분 동안 원심분리한다. 플라스미드는 몇 개의 우전자만 가지고 있고 특정조건에서 박테리아를 배양할 때 유용하게 사용된다 experiment(실험)실에서 유전자나 DNA 절편을 클로닝하기 위해서는, 먼저 플라스미드를 박테리아에서 분리한 후 외분의 DNA를 플라스미드에 집어넣는다.

6. Neutralization buffer를 350㎕넣고 9~10회 inverting해준다.

10. Washing bufferA 700㎕를 넣고 1분 원심분리하고 collection tube의 용액을 버린다. 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다.
이번 experiment(실험)은 박테리아에서 플라스미드를 추출해 내는 experiment(실험)으로 이렇게 적은 양의 박테리아로부터 플라스미드 DNA를 추출하는 방법을 miniprep라고 한다.

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