[자연과학]실습보고서 - 단백질 정량법
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작성일 24-03-29 11:20
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흡광도를 측정(測定) 할때는 595㎚에서 측정(測定) 을 해야 나온다.
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[자연과학]실습보고서 - 단백질 정량법
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다. 어느 단백질이든 동일한 염료를 더해준 후 약 5분 정도 반응시키고, 595㎚에서 흡광도를 측정(測定) 하기만 하면 되는 간단한 방법이지만 대신 Coomassie dye가 염, detergent, 지방 등에 의해 쉬이 effect(영향) 을 받는다는 단점이 있다 특히나 Sample에 계면 활성제가 조금이라도 존재하는 경우, 정량 값이 크게 effect(영향) 을 받게 되는데, 이는 염료로 사용하는 Coomassie Blue가 acidic하기 때문일것이다 단백질에 따라…(省略)
BSA1)
PAB2)
① BSA standard를 준비한다.
1.49㎎/㎖
② BSA를 1배, 2배, 4배, 8배 희석시킨 것과 PBS를 Micro Pipet으로 10㎍씩 따서 96 well plate에 5번째 칸부터 BSA 1.49㎎/㎖ 세로로 세 줄, 1.49/2를 세로로 세 줄 이런 식으로 순서대로 담는다. 염료로는 Coomassie Blue G-250을 사용하며, 이 염료가 단백질과 결합해 생기는 파장의 change(변화)를 측정(測定) 한다. (※ Micro Pipet 사용 시 한 번 사용한 Tip은 버리고 새로운 Tip을 사용한다.
④ 컴퓨터와 UV-Visible spectrophotometer을 이용하여 흡광도를 측정(測定) 한다.
⑤ 구한 차트의 함수식을 구하고 R²의 값이 1에 가까운지 확인한다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. 이 데이터들을 차트로 만들면 실험결과가 나온다.
◎ 이론(理論)
브래드 퍼드법(Bradford method)
UV-Visible Spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정(測定)
하여 표준 물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정(測定)
하는 방법중 하나이다.
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[자연과학]실습보고서 - 단백질 정량법
설명
실습보고서
`단백질 정량법`
◎ 목적
Bradford method를 통해 미지 시료의 단백질 농도를 알아보고 그 원리를 안다. 결과가 나오면 엑셀의 함수식 average를 이용해 mean or average(평균) 을 구한다.
브래드 퍼드법은 실온에서 사용가능하며, 어느 특별한 장비를 필요로 하지 않는다.)
