형질전환 experiment(실험) - 대장균 DNA 전기영동 observe
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작성일 23-03-07 20:22
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① 아이스버킷에 아이스를 넣을 준비, -70℃에 보관중인 Competent cell을 아이스에 꽂아서 녹였다. 이 균주를 액체 배지 상에서 적당한 세포수로 배양한 후 회수해서 플라스미드를 얻을 수 있다아 세포를 끓이거나(중탕 방법) 세포를 알칼리 상태에 두면(알칼리 세포파괴 방법) 세포가 용해되면서 세포내에 존재하는 플라스미드가 세포 밖 수용액 상에 나오게 된다 원심분리를 통해 세포 잔여물을 제거하면 플라스미드가 다량으로 녹아 있는 수용액을 얻을 수 있다아 이 수용액에 에틸 알코올이나 이소프로필 알코올을 처리하면 DNA가 침전되며 침전된 DNA를 적당한 완충용액에 녹임으로써 플라스미드 DNA를 정제할 수 있다 전기영동은 DNA나 protein의 size의 차이를 이용하여 size크기별로 구별하는 방법입니다. ◆가설 sample배지도 만들 수 있을 것 같고 LB plate(0.01% ampicillin)에 도말할 수 있을 것 같다 전기영동 구별을 하면 band가 나오는지 확인을 하는데 band의 굵기는 DNA양이 많이 나와 가려져서 안보이거나 2~3개지의 종류의 band 굵기가 나올 것 같다. sample배지도 만들었다.
reaction 능 세포(competant cell)
sample배지도 만들 수 있을 것 같고 LB plate(0.01% ampicillin)에 도말할 수 있을 것 같다 전기영동 구별을 하면 band가 나오는지 확인을 하는데 band의 굵기는 DNA양이 많이 나와 가려져서 안보이거나 2~3개지의 종류의 band 굵기가 나올 것 같다.
순서
band가 나오는지 유무확인 했다.(큐브를 흔들지 않는다)
10ng/ml 인데 50pg넣으려면 5ml
◆experiment(실험)목적
형질전환 실험,대장균 DNA 전기영동 관찰,대장균 DNA
◆가설
sample배지도 만들었다.
다.
설명
(1mg=1000ng=1000000pg / 1ng=1000pg)
② 100㎛ Competent cell에 DNA를 50pg 넣고 30분 동안 기다렸다.
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④ 2분 동안 아이스에 꽂아뒀다. band가 나오는지 유무확인 했다. 다당류로 이루어진 두꺼운 막, 즉 협막을 가진 S형균으로부터 DNA를 추출하여 이것을 다당류성 협막을 가지지 않은 R형균에 작용시키면 R형균의 일부가 S형균으로 변한다. 그러나 고등생물에 있어서도 세균류에서 볼 수 있는 것 같은 형질전환 이 일어나는지 어떤지는 아직 밝혀지지 않았다.
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③ 42℃ 항온수조에 45초 동안 담궈 두었다.
형질전환 experiment(실험) - 대장균 DNA 전기영동 observe
플라스미드가 들어갔는지 확인했다.
◆實驗방법
플라스미드 DNA의 분리는형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성 유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 이 균주를 배양하면, 플라스미드를 갖고 있는 형질 전환 균주는 항생물질이 존재하는 배지에서 살아남는다.
DNA loading buffer를 이용해서 size크기를 비교해보았다. 플라스미드가 들어갔는지 확인했다. 형질전환은 1928년 영국의 F.그리피스가 폐렴쌍구균을 이용하여 실시한 實驗이 계기가 되어 발견되었다. DNA loading buffer를 이용해서 size크기를 비교해보았다.
◆실험목적 LB plate(0.01% ampicillin)에 도말했다. 이것은 S형 세균의 DAN 가 R형 세균 속에 들어가서 유전자 발현을 하기 때문이다 전환을 일으키는데 필요한 DNA의 최소량은 약 10만분의 1 mol이며, DNA의 싱글스트랜드를 주는 것보다도 더블스 트랜드를 주는 쪽이 전환을 일으키기 쉽다. 형질전환 實驗에 의하여 유전자의 본체가 DNA라는 것이 밝혀졌다.
LB plate(0.01% ampicillin)에 도말했다.
형질전환은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적인 성질이 변하는 일을 말한다.
